மறுசீரமைப்பு டி.என்.ஏ மரபணு பொறியியல்

குளோனை தனிமைப்படுத்துதல்

பொதுவாக, ஒரு குறிப்பிட்ட மரபணு அல்லது டி.என்.ஏ வரிசையின் ஆர்வத்தை பெறுவதற்காக குளோனிங் மேற்கொள்ளப்படுகிறது. குளோனிங்கிற்குப் பிறகு அடுத்த கட்டம், அந்த குளோனை நூலகத்தின் மற்ற உறுப்பினர்களிடையே கண்டுபிடித்து தனிமைப்படுத்துவதாகும். ஒரு உயிரினத்தின் முழு மரபணுவையும் நூலகம் உள்ளடக்கியிருந்தால், அந்த நூலகத்திற்குள் எங்காவது விரும்பிய குளோன் இருக்கும். சம்பந்தப்பட்ட குறிப்பிட்ட மரபணுவைப் பொறுத்து அதைக் கண்டுபிடிப்பதற்கு பல வழிகள் உள்ளன. மிகவும் பொதுவாக, தேடப்பட்ட மரபணுவுக்கு ஒத்திசைவைக் காட்டும் குளோன் செய்யப்பட்ட டி.என்.ஏ பிரிவு ஒரு ஆய்வாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. எடுத்துக்காட்டாக, ஒரு சுட்டி மரபணு ஏற்கனவே குளோன் செய்யப்பட்டிருந்தால், அந்த குளோனை ஒரு மனித மரபணு நூலகத்திலிருந்து சமமான மனித குளோனைக் கண்டுபிடிக்க பயன்படுத்தலாம். ஒரு நூலகத்தை உருவாக்கும் பாக்டீரியா காலனிகள் பெட்ரி உணவுகளின் தொகுப்பில் வளர்க்கப்படுகின்றன. ஒவ்வொரு தட்டின் மேற்பரப்பிலும் ஒரு நுண்ணிய சவ்வு போடப்படுகிறது, மேலும் செல்கள் சவ்வுக்கு ஒட்டிக்கொள்கின்றன. செல்கள் சிதைந்து, டி.என்.ஏ ஒற்றை இழைகளாக பிரிக்கப்படுகிறது-அனைத்தும் சவ்வு மீது. ஆய்வு ஒற்றை இழைகளாக பிரிக்கப்பட்டு, பெரும்பாலும் கதிரியக்க பாஸ்பரஸுடன் பெயரிடப்பட்டுள்ளது. கதிரியக்க ஆய்வின் தீர்வு பின்னர் சவ்வு குளிக்க பயன்படுத்தப்படுகிறது. ஒற்றை-தனிமைப்படுத்தப்பட்ட டி.என்.ஏ சமமான மரபணுவைக் கொண்ட குளோனின் டி.என்.ஏவை மட்டுமே கடைபிடிக்கும். சவ்வு காய்ந்து கதிர்வீச்சு உணர்திறன் படத்தின் தாளுக்கு எதிராக வைக்கப்படுகிறது, மேலும் எங்காவது படங்களில் ஒரு கருப்பு புள்ளி தோன்றும், விரும்பிய குளோனின் இருப்பு மற்றும் இருப்பிடத்தை அறிவிக்கும். குளோன் பின்னர் அசல் பெட்ரி உணவுகளிலிருந்து மீட்டெடுக்கப்படலாம்.

மரபியல்: மறுசீரமைப்பு டி.என்.ஏ தொழில்நுட்பம் மற்றும் பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினை

தொழில்நுட்ப முன்னேற்றத்தின் முன்னேற்றத்தில் தொழில்நுட்ப முன்னேற்றங்கள் முக்கிய பங்கு வகித்தன. 1970 இல் அமெரிக்க நுண்ணுயிரியலாளர்கள் டேனியல் நாதன்ஸ்

.

டி.என்.ஏ வரிசைமுறை

டி.என்.ஏவின் ஒரு பகுதி குளோன் செய்யப்பட்டவுடன், அதன் நியூக்ளியோடைடு வரிசையை தீர்மானிக்க முடியும். நியூக்ளியோடைடு வரிசை என்பது ஒரு மரபணு அல்லது மரபணுவின் அறிவின் மிக அடிப்படையான நிலை. இது ஒரு உயிரினத்தை உருவாக்குவதற்கான வழிமுறைகளைக் கொண்ட வரைபடமாகும், மேலும் இந்த தகவலைப் பெறாமல் மரபணு செயல்பாடு அல்லது பரிணாமம் குறித்த புரிதல் முழுமையடையாது.

பயன்கள்

டி.என்.ஏ பிரிவின் வரிசை பற்றிய அறிவு பல பயன்பாடுகளைக் கொண்டுள்ளது, மேலும் சில எடுத்துக்காட்டுகள் பின்பற்றப்படுகின்றன. முதலாவதாக, ஒரு குறிப்பிட்ட புரதம் அல்லது பினோடைப்பின் குறியீடான மரபணுக்கள், டி.என்.ஏவின் பிரிவுகளைக் கண்டுபிடிக்க இதைப் பயன்படுத்தலாம். டி.என்.ஏவின் ஒரு பகுதி வரிசைப்படுத்தப்பட்டிருந்தால், மரபணுக்களின் சிறப்பியல்பு அம்சங்களுக்காக இது திரையிடப்படலாம். எடுத்துக்காட்டாக, திறந்த வாசிப்பு பிரேம்கள் (ORF கள்) - ஒரு தொடக்க கோடனுடன் தொடங்கும் நீண்ட வரிசைகள் (மூன்று அருகிலுள்ள நியூக்ளியோடைடுகள்; ஒரு கோடனின் வரிசை அமினோ அமில உற்பத்தியைக் கட்டளையிடுகிறது) மற்றும் ஸ்டாப் கோடன்களால் (அவை நிறுத்தப்படும் ஒன்றைத் தவிர) தடையின்றி இருக்கும் a புரத-குறியீட்டு பகுதி. மேலும், மனித மரபணுக்கள் பொதுவாக சிபிஜி தீவுகள் என்று அழைக்கப்படுபவை-சைட்டோசின் மற்றும் குவானைன் கொத்துகள், டி.என்.ஏவை உருவாக்கும் நியூக்ளியோடைட்களில் இரண்டு. அறியப்பட்ட பினோடைப்பைக் கொண்ட ஒரு மரபணு (மனிதர்களில் ஒரு நோய் மரபணு போன்றவை) வரிசைப்படுத்தப்பட்ட குரோமோசோமால் பகுதியில் இருப்பதாக அறியப்பட்டால், அப்பகுதியில் நியமிக்கப்படாத மரபணுக்கள் அந்த செயல்பாட்டிற்கான வேட்பாளர்களாக மாறும். இரண்டாவதாக, உயிரினங்களுக்குள்ளும் இடையிலும் பரிணாம உறவுகளைத் திட்டமிட வெவ்வேறு உயிரினங்களின் ஹோமோலோகஸ் டி.என்.ஏ காட்சிகளை ஒப்பிடலாம். மூன்றாவதாக, செயல்பாட்டு பகுதிகளுக்கு ஒரு மரபணு வரிசை திரையிடப்படலாம். ஒரு மரபணுவின் செயல்பாட்டை தீர்மானிக்க, ஒத்த செயல்பாட்டின் புரதங்களுக்கு பொதுவான பல்வேறு களங்களை அடையாளம் காணலாம். எடுத்துக்காட்டாக, ஒரு மரபணுவுக்குள் சில அமினோ அமில வரிசைமுறைகள் எப்போதும் ஒரு செல் சவ்வு பரவியிருக்கும் புரதங்களில் காணப்படுகின்றன; அத்தகைய அமினோ அமில நீட்சிகள் டிரான்ஸ்மேம்பிரேன் களங்கள் என்று அழைக்கப்படுகின்றன. அறியப்படாத செயல்பாட்டின் மரபணுவில் ஒரு டிரான்ஸ்மேம்பிரேன் டொமைன் காணப்பட்டால், குறியிடப்பட்ட புரதம் செல்லுலார் மென்படலத்தில் அமைந்துள்ளது என்று அது அறிவுறுத்துகிறது. பிற களங்கள் டி.என்.ஏ-பிணைப்பு புரதங்களை வகைப்படுத்துகின்றன. ஆர்வமுள்ள எந்தவொரு நபரும் பகுப்பாய்வு செய்ய டி.என்.ஏ காட்சிகளின் பல பொது தரவுத்தளங்கள் கிடைக்கின்றன.